更新时间:2026-02-09
点击次数:
束时在检测区某一点上采集的所有荧光信号就转化为一个以时间为横轴坐标, 荧光波长种类和强度为纵轴的信号数据的集合
经电泳后将各个荧光谱带分开,根据荧光颜色的不同来判断所代表的不 同碱基信息。
两极间极高的电势差推动着各个荧光DNA片段在凝胶高分子聚合物中从 负极向正级泳动并达到相互分离,且依次通过检测窗口由激光器发出的极细
ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记,带有荧光基团的ddNTP在掺入DNA片 段导致链延伸终止的同时,也使该片段端标上了一种特定的荧光染料
双脱氧链末端终止法通过使用链终止剂 一类似于正常dNTP的2,30兑氧 核苷三磷酸(ddNTP,将延伸的DNA链特异性地终止。
其反应体系也包括单链模板、引物、4种dNTP和DNA聚合酶。共分四组, 每组按一定比例加入一种(ddNTP,它能随机渗入合成的DNA链,一旦渗入合成 即终止,于是各种不同大小片段的末端核苷酸必定为该种核苷酸,可以从放射 自显影带上直接阅读DNA的核苷酸序列。
与dNTP相比,ddNTP在脱氧核糖的位置上缺少一个羟基,反应过程中虽然 可以在DNA聚合酶作用下,通过其磷酸基团与正在延伸的DNA链的末端脱氧核 糖-OH发生反应,形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中,但它们本身没有-0H,不 能同后续的dNTP形成磷酸二酯键,从而使正在延伸的DNA链在此终止。据此 原理分别设计四个反应体系,每一反应体系中存在相同的DNA模板、引物、四
种dNTP和一种ddNTP如ddATP),则新合成的DNA链在可能掺入正常dNTP的 位置都有可能掺入ddNTP而导致新合成链在不同的位置终止。由于存在ddNTP与dNTP的竞争,生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。
经测序分析软件对这些原始数据进行分析,最后的测序结果以一种清晰 直观的图形显示出来